الفصال العظمي (OA) هو أحد أمراض المفاصل العظمية التنكسية المزمنة طويلة الأمد والتي تؤثر على كبار السن فوق سن 65 عامًا [
1]. بشكل عام، يتم تشخيص مرضى هشاشة العظام بتلف الغضروف والتهاب الغشاء الزليلي وتآكل الخلايا الغضروفية، مما يؤدي إلى الألم والضيق الجسدي [
2]. يحدث الألم الناتج عن التهاب المفاصل في الغالب بسبب انحلال الغضروف في المفاصل بسبب الالتهاب، وعندما يتضرر الغضروف بشكل خطير يمكن أن تصطدم العظام مع بعضها البعض مما يسبب ألمًا لا يطاق وصعوبة بدنية [
3]. تم توثيق إصابة وسطاء التهابيين بأعراض مثل الألم والتورم وتيبس المفصل. لدى مرضى هشاشة العظام، توجد السيتوكينات الالتهابية، التي تسبب تآكل الغضروف والعظم تحت الغضروفي، في السائل الزليلي.
4من الشكاوى الرئيسية التي يعاني منها مرضى هشاشة العظام الألم والتهاب الغشاء الزليلي. لذلك، فإن الأهداف الرئيسية لعلاجات هشاشة العظام الحالية هي تخفيف الألم والالتهاب.
5]. على الرغم من أن علاجات هشاشة العظام المتاحة، بما في ذلك الأدوية غير الستيرويدية والستيرويدية، أثبتت فعاليتها في تخفيف الألم والالتهاب، إلا أن الاستخدامات طويلة الأمد لهذه الأدوية لها عواقب صحية وخيمة مثل اضطرابات القلب والأوعية الدموية والجهاز الهضمي والكلى. [
6]. وبالتالي، يجب تطوير دواء أكثر فعالية وأقل آثارًا جانبية لعلاج هشاشة العظام.
أصبحت المنتجات الصحية الطبيعية تحظى بشعبية متزايدة لكونها آمنة ومتوفرة بسهولة [
7]. لقد أثبتت الأدوية الكورية التقليدية فعاليتها ضد العديد من الأمراض الالتهابية، بما في ذلك التهاب المفاصل [
8]. يُعرف نبات أوكلانديا لابا دي سي بخصائصه الطبية، مثل تعزيز الدورة الدموية لتسكين الألم وتهدئة المعدة، وقد تم استخدامه تقليديًا كمسكن طبيعي للألم [
9]. تشير التقارير السابقة إلى أن A. lappa يمتلك خصائص مضادة للالتهابات [
10,
11], مسكن للألم [
12]، مضاد للسرطان [
13]، ومضادات الحموضة [
14] التأثيرات. تُعزى الأنشطة البيولوجية المتنوعة لـ A. lappa إلى مركباتها النشطة الرئيسية: كوستونوليد، ديهيدروكوستوس لاكتون، ديهيدروكوستونوليد، كوستوسلاكتون، ألفا-كوستول، سوسوريا لاكتون، وكوستوسلاكتون [
15]. تزعم دراسات سابقة أن الكوستونوليد أظهر خصائص مضادة للالتهابات في الليبوبوليساكاريد (LPS)، والذي حفز الخلايا البلعمية من خلال تنظيم مسار NF-kB وبروتين الصدمة الحرارية [
16,
17مع ذلك، لم تُجرِ أي دراسة بحثًا في الأنشطة المحتملة لـ A. lappa في علاج هشاشة العظام. وقد بحث البحث الحالي في التأثيرات العلاجية لـ A. lappa ضد هشاشة العظام باستخدام نموذج القوارض المُستحث بحمض الأسيتيك (أحادي يودو أسيتات الصوديوم).
من المعروف أن يودو أسيتات الصوديوم (MIA) يستخدم لإنتاج الكثير من سلوكيات الألم والسمات المرضية الفسيولوجية لمرض هشاشة العظام في الحيوانات [
18,
19,
20]. عند حقنه في مفاصل الركبة، يخل MIA بعملية التمثيل الغذائي للخلايا الغضروفية ويسبب الالتهاب والأعراض الالتهابية، مثل تآكل الغضروف والعظام تحت الغضروف، والأعراض الأساسية لمرض هشاشة العظام [
18]. تعتبر الاستجابة المتلوية التي يسببها حمض الأسيتيك على نطاق واسع بمثابة محاكاة للألم المحيطي في الحيوانات حيث يمكن قياس الألم الالتهابي كميًا [
19تُستخدم سلالة الخلايا البلعمية الفأرية RAW264.7 بشكل شائع لدراسة الاستجابات الخلوية للالتهاب. عند تنشيطها باستخدام LPS، تُنشّط الخلايا البلعمية RAW264 مسارات الالتهاب وتفرز العديد من الوسطاء الالتهابيين، مثل TNF-α وCOX-2 وIL-1β وiNOS وIL-6 [
20]. قامت هذه الدراسة بتقييم التأثيرات المضادة للألم والالتهابات لـ A. lappa ضد هشاشة العظام في نموذج حيواني MIA، ونموذج حيواني مستحث بحمض الأسيتيك، وخلايا RAW264.7 المنشطة بـ LPS.
2. المواد والطرق
2.1. المواد النباتية
تم الحصول على جذر نبات أ. لابا دي سي المجفف المستخدم في التجربة من شركة إيبوليب للأدوية المحدودة (سيول، كوريا). وقد حدده البروفيسور دونغ هون لي، من قسم علم الأدوية العشبية، بكلية الطب الكوري، جامعة غاشون، وأُودع رقم عينة القسيمة 18060301.
2.2. تحليل HPLC لمستخلص A. lappa
استُخلصت أ. لابا باستخدام جهاز ارتجاع (ماء مقطر، لمدة 3 ساعات عند درجة حرارة 100 درجة مئوية). رُشِّح المحلول المُستخلص وكثّف باستخدام مُبخِّر منخفض الضغط. بلغت نسبة إنتاج مستخلص أ. لابا 44.69% بعد التجفيف بالتجميد عند درجة حرارة -80 درجة مئوية. أُجري تحليل كروماتوغرافي لأ. لابا باستخدام جهاز HPLC مُتصل بنظام 1260 InfinityⅡ HPLC (أجيلنت، بال ألتو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية). للفصل اللوني، استُخدم عمود EclipseXDB C18 (4.6 × 250 مم، 5 ميكرومتر، أجيلنت) عند درجة حرارة 35 درجة مئوية. خُفِّفت كمية إجمالية قدرها 100 ملغ من العينة في 10 مل من ميثانول بتركيز 50%، وعُولجت بالموجات فوق الصوتية لمدة 10 دقائق. تم ترشيح العينات باستخدام مرشح حقنة (شركة ووترز، ميلفورد، ماساتشوستس، الولايات المتحدة الأمريكية) سعة 0.45 ميكرومتر. يتكون الطور المتحرك من 0.1% حمض الفوسفوريك (أ) وأسيتونتريل (ب)، وتم غسل العمود على النحو التالي: 0-60 دقيقة، 0%؛ 60-65 دقيقة، 100%؛ 65-67 دقيقة، 100%؛ 67-72 دقيقة، 0% مذيب (ب) بمعدل تدفق 1.0 مل/دقيقة. تم رصد السائل عند طول موجة 210 نانومتر باستخدام حجم حقن 10 ميكرولتر. أُجري التحليل في ثلاث نسخ.
2.3. إيواء الحيوانات وإدارتها
تم شراء ذكور فئران سبراغ داولي (SD) بعمر 5 أسابيع، وذكور فئران ICR بعمر 6 أسابيع من شركة سامتاكو بيو كوريا (جيونجي دو، كوريا). حُفظت الحيوانات في غرفة بدرجة حرارة ثابتة (22 ± 2 درجة مئوية) ورطوبة (55 ± 10%)، ودورة ضوء/ظلام 12/12 ساعة. تم تعريف الحيوانات بالظروف لأكثر من أسبوع قبل بدء التجربة. وُفرت لها كميات من العلف والماء حسب الرغبة. اتُبعت القواعد الأخلاقية الحالية لرعاية الحيوانات والتعامل معها في جامعة غاشون (GIACUC-R2019003) بدقة في جميع إجراءات التجارب على الحيوانات. صُممت الدراسة بطريقة التجربة المتوازية مع التعمية للباحثين. اتبعنا أسلوب القتل الرحيم وفقًا لإرشادات لجنة أخلاقيات التجارب على الحيوانات.
2.4. حقن وعلاج نقص المناعة البشرية
تم تقسيم الفئران عشوائيًا إلى أربع مجموعات: المجموعة الوهمية، ومجموعة الضبط، ومجموعة الإندوميثاسين، ومجموعة أ. لابا. بعد تخديرها بخليط 2% أيزوفلوران أكسجين، حُقنت الفئران بـ 50 ميكرولتر من محلول MIA (40 ملغ/م3؛ سيجما-ألدريتش، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكية) داخل مفصل الركبة، مما أدى إلى حدوث هشاشة عظام تجريبية. أُجريت العلاجات على النحو التالي: أُبقيت مجموعتا الضبط والمجموعات الوهمية على النظام الغذائي الأساسي AIN-93G فقط. أما مجموعة الإندوميثاسين، فقد زُوِّدت بإندوميثاسين (3 ملغ/كغ) مُدمجًا في النظام الغذائي AIN-93G، بينما وُضعت مجموعة أ. لابا بجرعة 300 ملغ/كغ على النظام الغذائي AIN-93G المُضاف إليه أ. لابا (300 ملغ/كغ). واستمرت العلاجات لمدة 24 يوما منذ يوم إحداث هشاشة العظام بمعدل 15-17 جرام لكل 190-210 جرام من وزن الجسم على أساس يومي.
2.5. قياس تحمل الوزن
بعد تحفيز هشاشة العظام، تم قياس قدرة تحمل الوزن للأطراف الخلفية للفئران باستخدام جهاز incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science، وودلاند هيلز، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) وفقًا للجدول الزمني. حُسب توزيع الوزن على الأطراف الخلفية: قدرة تحمل الوزن (%)
