هشاشة العظام (OA) هي واحدة من أمراض المفاصل التنكسية المزمنة طويلة الأمد التي تصيب السكان الذين تزيد أعمارهم عن 65 عامًا [
1]. بشكل عام، يتم تشخيص مرضى الفصال العظمي بتلف الغضاريف، والتهاب الغشاء الزليلي، وتآكل الخلايا الغضروفية، مما يسبب الألم والضيق الجسدي.
2]. يحدث ألم المفاصل في الغالب بسبب تآكل الغضروف في المفاصل بسبب الالتهاب، وعندما يتضرر الغضروف بشكل خطير يمكن أن تصطدم العظام ببعضها البعض مسببة ألمًا لا يطاق ومعاناة جسدية.
3]. تم توثيق تورط وسطاء الالتهابات مع أعراض مثل الألم والتورم وتصلب المفصل بشكل جيد. في مرضى الفصال العظمي، توجد السيتوكينات الالتهابية، التي تسبب تآكل الغضروف والعظم تحت الغضروفي، في السائل الزليلي [
4]. الشكوى الرئيسية التي يعاني منها مرضى الزراعة العضوية بشكل عام هي الألم والالتهاب الزليلي. ولذلك فإن الأهداف الأساسية لعلاجات الزراعة العضوية الحالية هي تقليل الألم والالتهابات. [
5]. على الرغم من أن علاجات الزراعة العضوية المتاحة، بما في ذلك الأدوية غير الستيرويدية والستيرويدية، أثبتت فعاليتها في تخفيف الألم والالتهابات، فإن الاستخدامات طويلة المدى لهذه الأدوية لها عواقب صحية خطيرة مثل اختلال وظائف القلب والأوعية الدموية والجهاز الهضمي والكلى.
6]. وبالتالي، لا بد من تطوير دواء أكثر فعالية مع آثار جانبية أقل لعلاج هشاشة العظام.
تتزايد شعبية المنتجات الصحية الطبيعية لكونها آمنة ومتوفرة بسهولة [
7]. أثبتت الأدوية الكورية التقليدية فعاليتها ضد العديد من الأمراض الالتهابية، بما في ذلك التهاب المفاصل.
8]. أوكلانديا لابا دي سي. معروف بخصائصه الطبية، مثل تعزيز الدورة الدموية لـ qi لتخفيف الألم وتهدئة المعدة، وقد تم استخدامه تقليديًا كمسكن طبيعي.
9]. تشير التقارير السابقة إلى أن A. lappa يمتلك مضادًا للالتهابات [
10,
11]، مسكن [
12]، مضاد للسرطان [
13]، ووقاية المعدة [
14] الآثار. تنجم الأنشطة البيولوجية المختلفة لـ A. lappa عن مركباته النشطة الرئيسية: كوستونوليد، ديهيدروكوستوس لاكتون، ديهيدروكوستونوليد، كوستوسلاكتون، ألفا-كوستول، سوسوريا لاكتون وكوستوسلاكتون [
15]. تزعم الدراسات السابقة أن كوستونوليد أظهر خصائص مضادة للالتهابات في عديد السكاريد الدهني (LPS)، مما أدى إلى تحفيز الخلايا البلعمية من خلال تنظيم NF-kB ومسار بروتين الصدمة الحرارية.
16,
17]. ومع ذلك، لم تحقق أي دراسة في الأنشطة المحتملة لـ A. lappa لعلاج الزراعة العضوية. قام البحث الحالي بدراسة التأثيرات العلاجية لـ A. lappa ضد الزراعة العضوية باستخدام (أحادي الصوديوم-يودواسيتات) MIA ونماذج القوارض المستحثة بحمض الأسيتيك.
يشتهر استخدام أسيتات أحادي الصوديوم (MIA) لإنتاج الكثير من سلوكيات الألم والسمات الفيزيولوجية المرضية للالتهاب الفصال العظمي في الحيوانات [
18,
19,
20]. عند حقنه في مفاصل الركبة، يؤدي MIA إلى خلل في استقلاب الخلايا الغضروفية ويسبب الالتهاب والأعراض الالتهابية، مثل الغضروف وتآكل العظام تحت الغضروف، وهي الأعراض الأساسية لمرض الفصال العظمي [
18]. تعتبر الاستجابة المتلوية المستحثة بحمض الأسيتيك على نطاق واسع بمثابة محاكاة للألم المحيطي في الحيوانات حيث يمكن قياس الألم الالتهابي كميًا.
19]. يُستخدم خط خلايا البلاعم الفأرية، RAW264.7، بشكل شائع لدراسة الاستجابات الخلوية للالتهابات. عند التنشيط باستخدام LPS، تقوم بلاعم RAW264 بتنشيط المسارات الالتهابية وتفرز العديد من الوسائط الالتهابية، مثل TNF-α وCOX-2 وIL-1β وiNOS وIL-6.
20]. قامت هذه الدراسة بتقييم التأثيرات المضادة للألم والمضادة للالتهابات لـ A. lappa ضد الزراعة العضوية في النموذج الحيواني MIA، والنموذج الحيواني الناجم عن حمض الأسيتيك، وخلايا RAW264.7 المنشطة بـ LPS.
2. المواد والأساليب
2.1. المواد النباتية
الجذر المجفف لـ A. lappa DC. تم شراء الدواء المستخدم في التجربة من شركة Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (سيول، كوريا). تم التعرف عليه من قبل البروفيسور دونغهون لي، قسم صيدلة الأعشاب، عقيد الطب الكوري، جامعة غاشون، وتم إيداع رقم عينة القسيمة على أنه 18060301.
2.2. تحليل HPLC لمستخلص A. lappa
تم استخراج A. لابا باستخدام جهاز الجزر (الماء المقطر، 3 ساعات عند 100 درجة مئوية). تم ترشيح المحلول المستخرج وتكثيفه باستخدام مبخر منخفض الضغط. حقق مستخلص A. lappa عائدًا قدره 44.69٪ بعد التجفيف بالتجميد تحت درجة حرارة -80 درجة مئوية. تم إجراء التحليل الكروماتوغرافي لـ A. lappa باستخدام HPLC متصل باستخدام نظام HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent، Pal Alto، CA، USA). للفصل اللوني، تم استخدام عمود EclipseXDB C18 (4.6 × 250 مم، 5 ميكرومتر، Agilent) عند 35 درجة مئوية. تم تخفيف إجمالي 100 ملغ من العينة في 10 مل من 50٪ ميثانول وتم صوتنة لمدة 10 دقائق. تم ترشيح العينات باستخدام مرشح حقنة (Waters Corp.، Milford، MA، USA) يبلغ 0.45 ميكرومتر. كان تكوين الطور المتحرك هو 0.1% من حمض الفوسفوريك (A) والأسيتونيتريل (B) وتمت تصفية العمود على النحو التالي: 0-60 دقيقة، 0%؛ 60-65 دقيقة، 100%؛ 65-67 دقيقة، 100%؛ 67-72 دقيقة، 0% مذيب B بمعدل تدفق 1.0 مل/دقيقة. وقد لوحظت النفايات السائلة عند 210 نانومتر باستخدام حجم حقن قدره 10 ميكرولتر. تم إجراء التحليل في ثلاث نسخ.
2.3. إسكان وإدارة الحيوانات
تم شراء فئران ذكور Sprague-Dawley (SD) بعمر 5 أسابيع وفئران ذكور ICR بعمر 6 أسابيع من Samtako Bio Korea (جيونج جي دو، كوريا). تم الاحتفاظ بالحيوانات في غرفة باستخدام درجة حرارة ثابتة (22 ± 2 درجة مئوية) والرطوبة (55 ± 10٪) ودورة الضوء / الظلام من 12/12 ساعة. تم تعريف الحيوانات بالحالة لأكثر من أسبوع قبل بدء التجربة. كان لدى الحيوانات إمدادات كافية من العلف والماء. تم اتباع القواعد الأخلاقية الحالية لرعاية الحيوان والتعامل معه في جامعة جاشون (GIACUC-R2019003) بدقة في جميع الإجراءات التجريبية على الحيوانات. وقد تم تصميم هذه الدراسة محاكمة المحقق أعمى وموازية. لقد اتبعنا طريقة القتل الرحيم وفقا للمبادئ التوجيهية للجنة الأخلاقيات التجريبية على الحيوان.
2.4. حقن وعلاج MIA
تم فصل الفئران عشوائيا إلى 4 مجموعات، وهي الشام، والسيطرة، والإندوميتاسين، وأ. لابا. تم تخدير الفئران باستخدام خليط الأيزوفلوران O2 بنسبة 2٪، وتم حقن الفئران باستخدام 50 ميكرولتر من MIA (40 مجم / م؛ سيجما ألدريش، سانت لويس، MO، الولايات المتحدة الأمريكية) داخل المفصل في مفاصل الركبة لتؤدي إلى الزراعة العضوية التجريبية. تم إجراء العلاجات على النحو التالي: تم الحفاظ على مجموعات المراقبة والشام فقط مع النظام الغذائي الأساسي AIN-93G. فقط، تم تزويد مجموعة الإندوميتاسين بالإندوميتاسين (3 ملجم/كجم) المدمج في نظام AIN-93G وتم تعيين مجموعة A. lappa 300 ملجم/كجم إلى نظام AIN-93G الغذائي المكمل بـ A. lappa (300 ملجم/كجم). استمرت العلاجات لمدة 24 يومًا منذ يوم تحريض الزراعة العضوية بمعدل 15-17 جم لكل 190-210 جم من وزن الجسم على أساس يومي.
2.5. قياس تحمل الوزن
بعد تحريض الزراعة العضوية، تم إجراء قياس قدرة تحمل الوزن للأطراف الخلفية للفئران باستخدام جهاز قياس العجز MeterTester600 (IITC Life Science، Woodland Hills، CA، USA) كما هو مقرر. تم حساب توزيع الوزن على الأطراف الخلفية: قدرة تحمل الوزن (%)
